關(guān)于液氮罐冷凍細(xì)胞的那些事
實(shí)驗(yàn)室里,，細(xì)胞的長期使用也需要長期冷凍保存,，以便于長期保存,，需要的時(shí)候取出來,。使細(xì)胞復(fù)蘇,，就是讓冬眠的細(xì)胞復(fù)蘇起來,?；貜?fù)其生命活力

　　其實(shí),，細(xì)胞凍存技術(shù)和復(fù)蘇技術(shù)已經(jīng)不是什么高科技,，不過這里面還有很多小的注意事項(xiàng)和流程方面需要的細(xì)節(jié)的。

　　一,、冷凍越慢越好,，復(fù)蘇越快越好

　　高大上的實(shí)驗(yàn)室可以使用程序冷凍儀，一切由機(jī)器代勞,，普通實(shí)驗(yàn)室就需要人工實(shí)現(xiàn)預(yù)凍的過程了,，不過，細(xì)胞冷凍越慢越好,，寧慢勿快,。做細(xì)胞冷凍前，事先留出充足的時(shí)間,。

　　而復(fù)蘇速度越快越好：從液氮罐里取出來之后,，迅速放在37°C水浴中，然后使勁搖呀搖,，令其盡快融化,。

　　二、高高興興上班,，平平安安回家

　　細(xì)胞凍存和復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)里面最容易出事的部分,，凡是和液氮罐接觸的操作，注意戴保護(hù)眼鏡和手套,。最需要小心的是：復(fù)蘇的時(shí)候,，在水浴中搖呀搖的時(shí)候，有時(shí)候小瓶會(huì)爆炸的,。所以,，一定要戴保護(hù)眼鏡和手套。

　　細(xì)胞凍存液中的DMSO是有毒致癌的,，接觸的時(shí)候一定一定要帶好手套,。

　　三,、凍存細(xì)胞數(shù)量要足夠

　　無論再怎么小心，細(xì)胞在冷凍和復(fù)蘇過程中總會(huì)死掉一批的,。所以,，一開始凍存細(xì)胞的數(shù)量要足夠。一般最低要達(dá)到5×106／毫升,，一瓶不夠兩瓶湊,。但是，這個(gè)不能一概而論,。有些細(xì)胞,，比如：雜交瘤細(xì)胞，只需要1－3x106／毫升,。

　　四,、做好標(biāo)記

　　把培養(yǎng)瓶放入提手，末端應(yīng)該扎有小牌,，注明主人的名字,，細(xì)胞名稱和凍存日期。還要在每個(gè)凍存管上寫上細(xì)胞名稱,，代數(shù)和凍存日期,。

　　實(shí)驗(yàn)室的液氮罐都是公用的，每個(gè)人應(yīng)該有屬于自己的提手,。毛博當(dāng)年就發(fā)生過為了找自己的細(xì)胞,，被迫把整個(gè)液氮罐翻了個(gè)底朝天的慘劇。

　　五,、細(xì)心呵護(hù)

　　剛剛復(fù)蘇的細(xì)胞就象剛剛出生的baby,，非常脆弱，需要我們的細(xì)心呵護(hù),。培養(yǎng)液要事先在培養(yǎng)箱或者水浴中復(fù)溫,，一切的和細(xì)胞接觸的動(dòng)作都要輕柔。

　　把細(xì)胞從凍存管里吸出來,，注入離心管,，要輕輕地吸取和滴加。包括給離心管補(bǔ)加培養(yǎng)液的時(shí)候,，都要輕輕地滴加。離心要用低速離心（500－1000轉(zhuǎn)／分鐘）,，吹打要用專用的吹打管,，而不要圖方便用移液槍，吹打也要輕輕的,。

　　六,、DMSO的問題

　　上面提到了DMSO是一種有毒致癌物質(zhì),。那么，解凍之后,，應(yīng)不應(yīng)該去除凍存液中的DMSO呢,？答案是no。除了極少數(shù)特別注明的對(duì)DMSO敏感的細(xì)胞外,，99％的細(xì)胞都不需要去除DMSO,，解凍后的頻繁換液會(huì)慢慢去除掉DMSO的。

　　七,、物離鄉(xiāng)貴,，人離鄉(xiāng)賤

　　解凍后的細(xì)胞要用和以前一樣的培養(yǎng)液和血清。因?yàn)槊恳环N細(xì)胞都有自己特定的,，并且已經(jīng)熟悉了的生長環(huán)境,。突然使用不一樣的培養(yǎng)液和血清，會(huì)造成細(xì)胞生長不良,，甚至死亡,。這和一個(gè)人突然離家千里，會(huì)水土不服是一樣的道理,。

　　細(xì)胞培養(yǎng)離不開人,。毛博還記得當(dāng)年當(dāng)實(shí)驗(yàn)狗的時(shí)候，放個(gè)長假都要惦記著培養(yǎng)箱里面的細(xì)胞是不是該換液了,。而掌握了有效的凍存和復(fù)蘇的技術(shù),，就可以解決這個(gè)問題。春節(jié)回家前把細(xì)胞都凍上,，過了年回來再開干,。