以過濾海水（水溫15℃,、pH8.1,、鹽度27%）為激活液（下同）,，精液與激活液混合后在顯微鏡下觀察精子活力（激活率、活動時間和壽命）,。激活率為給定視野中被激活精子的數(shù)量占全部精子數(shù)量的百分比,；運動時間是指精子自激活開始至90%的精子原地顫動為止所經(jīng)歷的時間,；精子的壽命指精子從激活開始至90%的精子停止運動的時間,。實驗重復(fù)3次。
稀釋液種類對精子超低溫冷凍保存效果的影響試驗分別以HBSS,、MPRS,、Cortland液為稀釋液（如表一），以10%EG為抗凍劑（抗凍劑為終濃度,，下同）配制抗凍液,；將精液與抗凍液按1︰3比例混勻,，4℃平衡30min；將平衡后的精液-抗凍液混合物分裝入0.25mL麥細管中,，然后用兩步降溫法（即將盛精麥細管平放在自制簡易降溫裝置的液氮面上7.5cm處,，停留10min后投入液氮中）保存。12h后,，將麥細管從液氮中快速取出，于40℃水浴中溶化后檢測精子激活率,。
自增壓液氮罐
稀釋比例對精子超低溫冷凍保存效果的影響試驗以10%EG為抗凍劑,、Cortland液為稀釋液配制抗凍液，將精液與抗凍液按1：1,、1：2,、1：3、1：4,、1：5,、1：7、1：9混勻,，按前文方法冷凍保存精子及解凍與激活率檢測,。
抗凍劑種類及濃度對精子超低溫冷凍保存效果的影響試驗以5%、10%,、15%及20%四個濃度的DMSO,、Gly、EG,、PG為抗凍劑,、Cortland液為稀釋液配制抗凍液，將精液與抗凍液按1︰3混勻,，然后冷凍保存精子及解凍與活力檢測,。
自增壓液氮罐 
