本實(shí)驗(yàn)觀察了大鼠胎腦組織在液氮中保存的細(xì)胞存活率，并用保存的組織和新鮮組織做同種異體移植實(shí)驗(yàn),。液氮罐

　　一、實(shí)驗(yàn)方法

　　正常妊娠15～21天的SD大鼠經(jīng)戊巴比妥鈉麻醉后,，在無菌條件下剖腹取胎,，切取所需胎腦組織，制成1mm大小的組織塊,。用吸管將其移入含10%二甲基亞砜(DMSO)的無血清DMEM培養(yǎng)液中,，裝進(jìn)凍存管，于4℃平衡1小時(shí)后置入-30℃冰箱,。約1小時(shí)后標(biāo)本溫度降至-30℃(降溫速率為0.5℃～1.0℃/分),，然后放入液氮中保存。需要時(shí),，取出凍存管于37℃水浴中復(fù)溫,，冰塊熔化后再用Hank液以1∶1比例對凍存液反復(fù)稀釋4次，每次3分鐘,。此時(shí)即可用于檢測和移植,。細(xì)胞存活率檢測先采用胰酶消化制成細(xì)胞懸液，用0.4%臺盼藍(lán)染色1分鐘,，再按血球計(jì)數(shù)方法對死活細(xì)胞分別計(jì)數(shù),，求出細(xì)胞存活率。腦內(nèi)組織移植分A,、B兩組進(jìn)行,，每組12只，分別進(jìn)行新鮮組織移植和保存組織移植,。兩種組織均取自胎鼠頂葉,，前者離開母體時(shí)間不超過20分鐘，后者在液氮中保存30天,。采用左頂葉皮層切開移植,，每次植入3～5塊組織。飼養(yǎng)6～8周后處殺,，取腦,，連續(xù)石蠟切片，進(jìn)行HE,、Nissl和嗜銀染色,。

　　二、結(jié)果

　　細(xì)胞存活率觀察：不同部位組織在液氮中保存10天和30天,，細(xì)胞存活率(%)大腦組織為67.78±4.46和65.14±4.55,，小腦組織為68.93±5.67，腦干組織為71.07±7.43和69.63±1.99,。經(jīng)方差分析,，三種組織之間細(xì)胞存活率差別不顯著(P>0.05),，不同保存時(shí)間之間細(xì)胞存活率差別也不顯著(P>0.05)。液氮罐

　　腦內(nèi)移植組織學(xué)觀察：A組移植物成活例數(shù)7/12,，移植物位于皮層下或伸入側(cè)腦室,，體積較大，周邊有薄層膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)帶,。移植物內(nèi)是均勻分布的大型神經(jīng)元和少量散在的膠質(zhì)細(xì)胞,。神經(jīng)元核大，染色淡,，核仁清楚,，并可見到雙核仁細(xì)胞，胞漿中尼氏小體豐富,。移植物內(nèi)有新生血管結(jié)構(gòu)及比較致密的神經(jīng)纖維網(wǎng),，在交界面上也有少量神經(jīng)纖維。B組移植物成活例數(shù)2/10(2例感染不計(jì)),，移植物位于皮層下，體積小,，呈散在的細(xì)胞團(tuán)樣,，神經(jīng)元核大淡染，胞漿不豐富,。移植物內(nèi)也可見到血管內(nèi)皮細(xì)胞,，嗜銀染色見移植物中神經(jīng)纖維稀少。

　　三,、討論

　　本實(shí)驗(yàn)考察了兩步法梯度降溫液氮保存胎腦組織的可能性,。此法保存大鼠胎腦組織10天和30天平均細(xì)胞存活率在60%～70%。將新鮮的和保存30天的組織植入同種大鼠腦內(nèi),，組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)兩組都有移植物成活,，但是與新鮮組織移植相比，保存的組織移植后移植物體積小,，神經(jīng)元數(shù)量少,，胞漿不豐富，移植物內(nèi)神經(jīng)纖維少見,，表明神經(jīng)元分化較差,。結(jié)果提示，用兩步法梯度降溫液氮保存胎腦組織可取得較高的細(xì)胞存活率,，移植后也有一定的成活率,，但是移植物成活質(zhì)量明顯不如新鮮組織移植。所以,，這種保存方法能否實(shí)際應(yīng)用還值得討論和進(jìn)一步研究,。液氮罐