很多時候,，我們需要把細胞冷凍起來,，以便于長期保存,，以備不時之需。而復蘇,，就是使冷凍的細胞蘇醒過來,，恢復活力。液氮罐廠家

其實,，細胞凍存和復蘇的protocol教科書和實驗手冊上面都有,。毛博我不想再重復了,。這里,，毛博根據(jù)自己做細胞培養(yǎng)近10年的經驗和體會，談談應該注意的一些事項和技巧,，大部分都是血淚教訓和經驗總結,。都是干貨喲。

1冷凍越慢越好,，復蘇越快越好

高大上的實驗室可以使用程序冷凍儀,。一切由機器代勞。屌絲實驗室就只好用人肉程序冷凍儀,。具體的protocol,，到處都有。毛博想提醒大家的是,，細胞冷凍越慢越好,，寧慢勿快。做細胞冷凍前,，事先留出充足的時間,。

而復蘇速度越快越好。從液氮罐里取出來之后,，迅速放在37°C水浴中,，然后使勁搖呀搖。令其盡快融化,。

2高高興興上班,，平平安安回家

細胞凍存和復蘇是細胞培養(yǎng)技術里面最容易出事的部分。凡是和液氮接觸的操作,，注意戴保護眼鏡和手套,。最需要小心的是：復蘇的時候，在水浴中搖呀搖的時候,。有時候小瓶會爆炸的,。所以，一定要戴保護眼鏡和手套,。不多說了,，說多了滿眼都是淚,。還有，凍存液中的DMSO是有毒致癌的,。接觸的時候一定一定要帶好手套,。

3凍存細胞數(shù)量要足夠

無論再怎么小心，細胞在冷凍和復蘇過程中總會死掉一批的,。所以,，一開始凍存細胞的數(shù)量要足夠。一般最低要達到5×106/毫升,，一瓶不夠兩瓶湊,。但是，這個不能一概而論,。有些細胞,，比如雜交瘤細胞，只需要1-3x106/毫升,。液氮罐廠家

4做好標記

把培養(yǎng)瓶放入提手,，末端應該扎有小牌，注明主人的名字,，細胞名稱和凍存日期,。還要在每個凍存管上寫上細胞名稱，代數(shù)和凍存日期,。

實驗室的液氮罐都是公用的,。每個人應該有屬于自己的提手。毛博當年就發(fā)生過為了找自己的細胞,，被迫把整個液氮罐翻了個底朝天的慘劇,。

 

5細心呵護

剛剛復蘇的細胞就象剛剛出生的baby，非常脆弱,。需要我們的細心呵護,。培養(yǎng)液要事先在培養(yǎng)箱或者水浴中復溫。一切的和細胞接觸的動作都要輕柔,。把細胞從凍存管里吸出來,，注入離心管，要輕輕地吸取和滴加,。包括給離心管補加培養(yǎng)液的時候,，都要輕輕地滴加。離心要用低速離心(500-1000轉/分鐘),。吹打要用專用的吹打管,，而不要圖方便用移液槍，吹打也要輕輕的,。

6DMSO的問題

上面提到了DMSO是一種有毒致癌物質,。那么,，解凍之后，應不應該去除凍存液中的DMSO呢?答案是no,。除了極少數(shù)特別注明的對DMSO敏感的細胞外,，99%的細胞都不需要去除DMSO。解凍后的頻繁換液會慢慢去除掉DMSO的,。液氮罐廠家

7物離鄉(xiāng)貴,，人離鄉(xiāng)賤

解凍后的細胞要用和以前一樣的培養(yǎng)液和血清。因為每一種細胞都有自己特定的,，并且已經熟悉了的生長環(huán)境,。突然使用不一樣的培養(yǎng)液和血清，會造成細胞生長不良,，甚至死亡,。這和一個人突然離家千里，會水土不服是一樣的道理,。

細胞培養(yǎng)是個苦活，根本離不開人,。毛博還記得當年當實驗狗的時候,，放個長假都要惦記著培養(yǎng)箱里面的細胞是不是該換液了。而掌握了有效的凍存和復蘇的技術,，就可以解決這個問題,。春節(jié)回家前把細胞都凍上，過了年回來再開干,。